活性葡聚糖硫酸酯超滤分级及其抗凝血活性研究

葡聚糖硫酸酯的超滤分级及其抗凝血活性研究

葡聚糖硫酸酯的超滤分级及其抗凝血活性

研究

时珍国医国药2007年第l8卷第5期

LISH1 ZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2007VOL.18NO.5

葡聚糖硫酸酯的超滤分级及其抗凝血活性研究

师少飞,王兆梅,郭祀远,蓝嘉

(华南理工大学轻工与食品学院,广东广州510640)

摘要:目的研究各种葡聚糖硫酸酯(Gs)超滤分级的体外和对大鼠的体内抗凝血活性.方法通过超滤分级的方法获得

截留分子量不同的Gs级分,并测其特性黏度[];分别研究不同[]的Gs对大鼠凝血时间(cT)和全血复钙时间(RT)

的时效性和量效性.结果各种[]的Gs均能显着延长cT和RT,且呈剂量依赖性;GS给药2h时抗凝血活性达到最

大;不同[]的Gs对cT和RT的延长作用不同,[]为274.8ml/g的Gs的抗凝血活性最强.结论不同[T1]Gs均具有

抗凝血活性,[]为274.8ml/g的GS抗凝血活性最强,与活性为175IU/mg的低分子量肝素相"-3.

关键词:抗凝血;葡聚糖硫酸酯;特性黏度

中图分类号:R96511;R97312文献标识码:A文章编号:1008-0805(2007)05—1038-02

AnticoagulatingEffectofGlucosanSulfateswithDifferentIntrinsicViscosity

SHIShao—fei.WANGzhao—mei,GUOSi—yuan,LANJia

(ResearchInstituteofLightIndustryandFoodTechnology,SouthChinaUniversityofTechn

ology,Guangzhou,

Guangdong,510640China)

Abstract:O bjectiveToas s e s stheanticoagulativeactivityofslucos ansulfatewithdifferentintrinsicvis c o sityinvivoandinvitro.MethodsGlucosansulfateswithdifferentintrinsicviscositywereobtainedbymultipleultra—filtrationofglucosansulfaterawmaterialandtheirintrinsicviscositiesweremeasured.Coagulationtime(CT)andreca~lcificationtime(RT)wereme asuredusingatesttubemethod.ResultsCTandRTincreasedbytheanticoagulationoffractionedglucosansulfates,andtheyshowedasignificantdose—dependentrelationship.TheanticoagulationeffectWasmaximum after2hofadministration.TheCTandRTweredifferentwithdifferentfractionsofglucosansulfate s.Theanticoagnlationoftheglucosansulfatewithintrinsicviscosityof

274,8ml/gWasthehighest.ConclusionTheanticoagnlationCanbeenhancedsignificantlybytheglucosansulfatewithdifferentintrinsicvis cosity.Thehighertheintrinsicvis cosityWas,thehighertheeffectofanticoagulantactivityWas.The antic oagulantac-tivityoftheglucosansulfatefractionwithanintrinsicvis cosityof274.8ml/gWasthesanleas 175IU/mgoflowmolecularweightheparin.

Keywords:Anticoagulate;Glucosansulfates;Intrinsicviscosity

抗凝(血)剂在临床上用于抗凝治疗脑血管内凝血综合征,

深度静脉栓塞以及预防心肺系统凝血的发生等,也是活血化淤药

物的重要组成部分".J.在体外,抗凝剂用于生物相容性医用材

料领域和血管美容化妆品领域,是值得广泛开发的多功能

产品.

目前,临床上常用的抗凝剂是肝素,不同来源的肝素存在着

结构和活性不稳定,易于携带多种危害人体健康的动物致病菌等

不足.因此,开发安全,稳定的肝素替代品正引起广泛关注.硫

酸酯多糖是一类具有抗凝血活性的物质,GS是葡聚糖经硫酸酯

化修饰得到的半合成硫酸酯多糖,前期研究发现GS在体外具有

突出的抗凝血作用.本文在此基础上,进一步研究其在动物体内的抗凝血活性.

1材料与方法

1.1材料SD大鼠,160,190g,雌雄各半,由中山大学医学院动物部提供;葡聚糖硫酸酯原料,自制;低分子量肝素(LowMolecu—larWeightHeparin,LMWH),山东省齐鲁制药厂生产,抗凝效价为175IU/mg.

收稿日期:2Oo6-09-06;修订日期:2007-01-2l基金项目:广东省自然科学基金博士科研启动基金资助(No,05300177)

作者简介:师少飞(1980一),男(汉族),山西忻州人,现为华南理工大学轻工与食品学院在读硕士研究生,学士学位,主要从事离子液中纤维素硫酸酯抗凝血活性研究工作.

'通讯作者简介:郭祀远(1939一),男(汉族),广东潮州人,现任华南理工大学轻工与食品学院教授,博士生导师,博士学位,主要从事天然糖质分离纯化新方法新技术的研究.

?

1038?

杯式超滤器由聚醚砜超滤膜(中科院膜研究所),压缩氮气瓶及联接管道配件组成.

1.2葡聚糖硫酸酯的超滤分级及表征

1.2.1超滤分级采用截留分子量分别为4K,10K和50K的聚醚砜膜对GS原料进行二级超滤分级,得到4个级分,分别用Fl,f,2.F3和F 4表示.

1.2.2[]测定以毛细管黏度计,采用逐步稀释法j.

1.3大鼠凝血时间(cr)和全血复钙时间(aT)的测定

1.3.1 CT测定大鼠给药一定时间后,以复方噻胺酮(10mL/)肌肉注射麻醉,从心脏取血1.0ml于塑料试管中,1min后每隔10S缓慢倾斜试管1次,记录倾斜试管时液面不动(纤维蛋白形成)时间,即为CT.

1.3.2RT测定大鼠腹腔动脉采血0.9ml,加入预先盛有0.1 ml3.8%枸橼酸钠的试管中,并在每支试管中加入待测样品0.01 frIl,37?水浴中孵育1min,每支试管中再加入

0.1 ml0.01 moL/L的CaC1:,混匀后开始计时,记录倾斜试管时液面不动时间,即为RT】 .

1.4统计学处理结果以孟?s表示,组问比较采用t检验,P<0.05,认为有显着性差异.

2结果

2.1 GS的超滤分级GS原料经过截留分子量为4000,10000. 50000三级超滤分级,得到4个GS级分,分别用F1,F2,F3,F4表示,其特性黏度分别为1.1,46.3,71.2,274.8ml/g.结果见表1.

2.2 GS抗凝血作用的时一效关系GS给药1 h后,凝血指标CT

LISHIZHENMED1 C1 NEANDMATERIAMED1 CARESEARCH2007VOL.18NO.5

时珍国医国药2007年第18卷第5期

值与对照组(0h)相比均明显增大;以后,随着给药时间延长至1.5h,CT值进一步提高.在给药后2.0h,CT值达到最大.给药后2.5h,CT值开始降低,3.0h时,CT值更低.表明Gs经皮下给药,2h后药效达到最大,以下研究中均以给药2h后采血测定.见表2.

表1 GS的超滤分级结果

2.3GS抗凝血作用的量一效关系各GS级分的浓度均为0.6 g/L(相当于0.6mg/kg)时,即可显着延长大鼠的凝血时间cT和RT,经统计分析,各浓度实验组所对应的CT值和RT值与空白对照组之间均存在显着性差异,表明GS具有突出的抗凝血活性.且随着Gs级分浓度的提高,其所对应的凝血指标值进一步增大,说明GS的抗凝血活性具有显着的剂量依赖效应,在本实验浓度范围内,增加GS的浓度,可显着提高其抗凝血作用.结果

见表3—4.

表2Gs作用时间对大鼠cT值的影响(i?s)min Fl

F2

F3

F4

1.1O?0.06

1.1O?0.06

1.1O?0.06

2.93?O.06'

3.2O?O.1l

3.25?O.O8

3.40.t-O.10

3.65?O.O8

4.15?O.17'

3.67?O.1l

3.8O?0.09'

4.37?O.12

4.0o?O.12'

4.37?O.O7'

5.O5?O.14

1.10.t-O.063.42.t-O.15'4.42.t-O.245.47?O.2l'5.92.t-O.25'

与空白对照组比较. 'P<O.05;n=82.4[]对GS抗凝血活性的影响对照组(0h)时,4个[]样品的CT无显着差异,给药1 h,F4与Fl开始有明显差异,到2h,4个样品CT值均达到最大,而且它们之间差异显着,F4的CT值最大,说明其抗凝血效果最好.结果见表2.从表3可看出,4个样在给药量0.6g/L时,F4与Fl的CT值差异开始显着,随着浓度的增加,这种差异越来越明显,当浓度

为0.9 g/L时,4个级分之间的CT值差异都开始明显,且随着[11]增大,其凝血效果越明显,说明在相同浓度下,F4的凝血时间最大.从表4可知,在给药0.6g/L时,4个样品之间的RT差异显着.表明F4的在各种实验浓度下RT均高于其它[11]的样品.综合以上分析,在实验范围内,Gs的[11]越高,抗凝血活性越强.

2.5与未分级Gs及I 31 WH的比较GS与LMWH间比较中可以看出,在0.6 g/L浓度下,4个级分所对应的CT均低于LM—WH,但在浓度为0.9 g/L时,F4与LMWH的RT统计差异不显着,说明[11]大的G s在较高浓度下抗凝血效果与LMWH相当.对各级分与未分级Gs间进行比较,在0.6g/L浓度下,各Gs级分所对应的CT与未分级GS之间不存在显着性差异;F3和F4所对应的RT值要明显高于F5.当浓度为0.9g/L时,F4的cT也显着高于F5,F3和F4的RT要高于F5.这说明F4的抗凝血效果明显高于未分级GS.结果见表5.

表5与其它抗凝血药物的比较(i?s)rain

与空白对照组比较. 'P<O.05;n:83讨论

GS是葡聚糖c 6和c2位上的羟基被硫酸酯基取代后的产物,是一种硫酸酯多糖.本文实验结果表明,GS具有突出的体外和体内抗凝血活性,这与其结构中的硫酸酯基聚阴离子与血液中?

l039?

时珍国医国药2007年第18卷第5期

LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2007VOL.18NO.5

带正电荷的凝血酶的结合以及葡聚糖主链所产生的模板效应有关J.与抗凝剂肝素一样,在给药2.0h时CT值达到最大,且随着给药浓度的增大其cT和RT值均逐渐增大,说明Gs的抗凝血LjJ

效应具有显着的时效性和突出的量效性,这与其药代动力学有…

关.[T1]是间接反映大分子几何尺寸的重要指标,在本实验范围

内,GS的抗凝血活性随着[]的增加而增大,这主要是因为[T1]r]

越大,分子中硫酸酯基负电荷量越多,与凝血酶的结合量越大,因

此,造成血液中凝血酶失活程度增高.至于超出这一范围时进, 『6]

步提高[T1]是否能得到更好的抗凝血效果,这还需要综合考虑分

子尺寸对其药物扩散的影响,值得进一步研究.

[7]参考文献

:

『1]Lar~sonR.LamrO.OlssonP.Thesearchforthrombomsistanceusing. .immobifizedheparin[J].AnnNYAcadS ci1987,516:102.

[2]RhodesNP,WilliamsDF.PlasmarecMcificationasameasureofcon—tac tphas e ac tivationandhepariniz atione ffic acyafterc ontac twithbio-materials[J].Biomaterials1994,l5:35.

王兆梅.李琳,胡松青,等.两种硫酸化纤维素钠的结构和抗凝血

活性研究[J].林产化学工业,2003,23(3):23.

GrothT,Wagenkne chtW.Anticoagulantpotentialofregios ele ctivede—

rivatizedcellulose[J].Biomaterials,200l,22:2719.陈振聪,王兆梅,李琳,等.生物活性纤维素硫酸酯的超滤分级研

究[J].食品科学,2005,26(11):47.

FangC ao.BingxiangYuan.Experimentalstudyaboutstypticactinofdidanmingmucapsuleinanimals.ChineseArchivesofTraditionalChi?neseMedicine[J】 .November2004.22(11):1084.

N.K.Mary.B.H.BabuandJ.Padikkala.Antiatherogenieeffectof

CapsHT2.aherbalAyurvedicmedicineformulation[J].Phytomedi—cine,2003,10(6—7):474.

徐丽琴,尚德静,李庆伟,等.林蛙头多糖抗凝血活性的研究[J].中

药新药与临床药理,2006,17(2):l1O.

淮山药多糖的免疫调节作用研究

徐增莱,汪琼,赵猛,徐琴,贾成森,史云云

(江苏省中国科学院植物研究所?南京中山植物园,江苏南京210014)

摘要:目的探讨淮山药粗多糖对小鼠的免疫调节作用.方法小鼠灌胃给予不同荆量

(200,4O0和800mg/kg)的淮山药

多糖,1&/d,连续8 d,进行C o以诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验(M'I q"法),测定

血清溶血素测定(半数溶血值法),小

鼠碳廓清实验.结果山药多糖具有增强小鼠淋巴细胞增殖能力的作用,促进小鼠抗

体生成的作用和增强小鼠碳廓清能

力的作用.结论淮山药多糖具有一定的免疫功能增强作用.

关键词:淮山药;多糖;免疫调节

中图分类号:R285.5文献标识码:A文章编号:1008-0805(2007)05—1040-02

TestontheImmunity—moderatingFunctionofDioscoreaoppostitaThunb.Polysacc ha-ride

XUZeng—lai,WANGQiong,ZHAOMeng,XUQin,JIACheng—sen,SHIYun—yun

(InstituteofBotany,]iangsuProvinceandChineseAcademyofSciences/NanjingBotanicalGardenofMem.Sun

Yat—sen,Nanjing210024,China)

Abstract:ObjectiveToinvestigatetheimmunologicenhancementofDi oscoreaoppositaThunb.polysaccharide.Methods—

DioscomaopposkaThunb.polysacchar/deindifferentdosages(200,400,800mg/kg)weregivenbyIGfor8d.Aseriesoftestswerecarriedout,sucha8thespleenlymphcellstransformationofConAinducingmethod(MTrmethod),hemolytictestofbloodserumandhemchromeandmousecarb ontest.ResultsTheresultsshowedthatDioscoreaoppositaThunb.polysaccharidewas sig-nificanttoConAinducedmiceLymphocytetransformationtest;HC50raisedinallthreeconcentrations;ratioo fmonoeyte—macro-phagecarbongraineliminationhas significantchangestothecontro1.ConclusionDioscoredoppositaThunb.polysaccharidepos—sessesapotentialeffectofimmuneregulation.

Keywords:DioscoreaoppositaThunb.;Polys ac charide;Immunitymoderation

山药属常用中药,味甘,性平,具有补脾养胃,生津益肺,补肾涩精等作用.山药多糖DioscoreaoppositaThunb.polysaccharide是从山药中分离提纯的水溶性多糖成分,具有免疫调节作用.以往有关山药的药理研究多针对河南省出产的铁棍山药和太谷山药