细胞阿丽克丝·布莱肯瑞吉

中国肿瘤生物治疗杂志摇澡贼贼责:辕辕憎憎憎援遭蚤燥贼澡藻则援燥则早悦澡蚤灶允悦葬灶糟藻则月蚤燥贼澡藻则,韵糟贼援圆园员园,灾燥造援员苑,晕燥援缘阅韵陨:员园援猿愿苑圆辕躁援蚤泽泽灶援员园园苑鄄猿愿缘载援圆园员园援园缘援园员远·短篇论著·吉西他滨联合再匀鄄员远对肝癌干细胞样细胞的影响耘枣枣藻糟贼燥枣早藻皂糟蚤贼葬遭蚤灶藻糟燥皂遭蚤灶藻凿憎蚤贼澡再匀鄄员远燥灶造蚤增藻则糟葬灶糟藻则泽贼藻皂鄄造蚤噪藻糟藻造造泽易善永员,圆,南克俊圆,陈摇静圆,姜丽丽圆(员援郑州市中心医院肿瘤科,河南郑州源缘园园园苑;圆援西安交通大学医学院第一附属医院肿瘤中心,陕西西安苑员园园远员)[摘摇要]摇目的:探讨吉西他滨联合重组人血管内皮抑制素再匀鄄员远对裸鼠悦阅员猿猿垣酝匀悦悦怨苑匀肝癌移植瘤中肝癌干细胞样细胞的影响.
方法:用免疫磁珠分选酝匀悦悦怨苑匀中肝癌干细胞样细胞,将其接种到圆园只裸鼠皮下,建立移植瘤模型.
治疗组给予吉西他滨和再匀鄄员远,对照组给予等量生理盐水,比较两组移植瘤大小变化及原代培养细胞球形成情况,流式细胞术检测原代培养中悦阅员猿猿垣细胞百分率.
结果:治疗组的移植瘤明显缩小,治疗组和对照组细胞球形成数目分别为(苑援缘依圆援源)个增泽(员远援园依猿援缘)个,细胞球直径分别为(员苑愿援猿园依员怨援圆员)μ皂增泽(员猿员援园远依圆园援怨远)μ皂(孕约园援园缘);治疗组和对照组原代培养中悦阅员猿猿垣细胞百分数分别为(远援圆源依园援怨远)豫增泽(员愿援圆远依员援苑远)豫(孕约园援园缘).
结论:低剂量吉西他滨联合再匀鄄员远可抑制血管内皮细胞破坏肝癌干细胞样细胞的血管巢,进而选择性清除肝癌干细胞样细胞.
[关键词]摇肝癌干细胞样细胞;吉西他滨;再匀鄄员远[中图分类号]摇砸苑猿缘援苑;砸苑猿园援缘源摇摇摇摇[文献标志码]摇粤摇摇摇摇[文章编号]摇员园园苑鄄猿愿缘载(圆园员园)园缘鄄园缘远圆鄄园猿[作者简介]摇易善永(员怨苑园原),男,河南省郑州市人,博士,主要从事肿瘤综合治疗及个体化治疗工作[通信作者]摇南克俊(晕粤晕运藻鄄允怎灶,糟燥则则藻泽责燥灶凿蚤灶早葬怎贼澡燥则),耘鄄皂葬蚤造:灶葬灶噪蚤躁岳员远猿援糟燥皂摇摇研究[员鄄猿]发现,肿瘤是在一小部分具有无限增殖、自我更新和多向分化潜能的肿瘤干细胞(糟葬灶糟藻则泽贼藻皂糟藻造造,悦杂悦)驱动下发生的.
悦杂悦不仅是肿瘤发生、发展的关键,而且还是肿瘤复发和转移的根源.
针对悦杂悦治疗,可更有效地抑制肿瘤发生、发展、转移及复发的根源,进而有可能治愈肿瘤[源鄄远].
目前大部分研究都是直接针对悦杂悦进行干预.
本研究试图用低剂量吉西他滨联合重组人血管内皮抑制素再匀鄄员远来抑制血管内皮细胞,进而破坏肝癌干细胞样细胞的血管巢,探讨其是否可以选择性地清除肝癌干细胞样细胞.
员摇材料与方法员援员摇主要试剂与药品吉西他滨为江苏豪森药业产品,再匀鄄员远购自烟台麦得津生物工程股份有限公司.
砸孕酝陨员远源园培养基、胶原酶Ⅳ购自美国杂蚤早皂葬公司,鼠抗人悦阅员猿猿抗体购自美国砸驭阅公司.
员援圆摇悦阅员猿猿垣酝匀悦悦怨苑匀肝癌干细胞样细胞的分选取对数生长期的人肝癌酝匀悦悦怨苑匀细胞,胰酶消化,园援源豫锥虫兰染色,计数活细胞.
取上述的酝匀悦悦怨苑匀细胞,按员园园μ造辕员园愿的比例加入云糟砸阻断试剂,缘皂蚤灶后按员伊员园愿颐员园园μ造的比例加入抗鄄悦阅员猿猿抗体磁珠,标记酝匀悦悦怨苑匀细胞.
充分混匀后在源耀愿益冰箱内孵育圆缘皂蚤灶,然后加入缓冲液,离心弃上清,制备员伊员园愿的酝匀悦悦怨苑匀细胞悬液;过酝粤悦杂分离柱分选悦阅员猿猿垣酝匀悦悦怨苑匀细胞.
员援猿摇荷瘤小鼠模型的建立及吉西他滨和再匀鄄员远联合治疗下悦阅员猿猿垣酝匀悦悦怨苑匀移植瘤的原代培养裸鼠接种悦阅员猿猿垣酝匀悦悦怨苑匀细胞后员员凿,移植瘤体达到园援缘糟皂左右.
将荷瘤小鼠随机分为圆组(灶越员园),治疗组给予吉西他滨员皂早辕噪早腹腔注射化疗(员耀圆员凿),同时给予再匀鄄员远缘皂早辕噪早,腹腔注射治疗(员耀员源凿);对照组在相同的时间内给予等量生理盐水腹腔注射.
治疗结束后切下移植瘤,置于培养皿中剪碎,加入园援员豫胶原酶Ⅳ消化,纱布过滤后裂解红细胞,制备细胞悬液.
将上述细胞悬液加入怨远孔板的中间猿园个孔中,每孔员园园μ造,置于猿苑益、缘豫悦韵圆培养箱中培养,观察细胞球生长情况.
圆周后镜下计数含缘园个细胞以上的细胞球数量,并测量细胞球的大小.
员援源摇流式细胞仪检测移植瘤原代培养中悦阅员猿猿垣细胞的表达分别取上述原代培养的各组细胞,用园援圆缘豫的胰酶消化,园援园员豫孕月杂缓冲液洗涤、重悬、计数,制备成单细胞悬液.
将细胞悬液员园园园则辕皂蚤灶离心缘皂蚤灶,弃上清液,用孕月杂洗涤,取员伊员园远个细胞重悬于员园园μ造的园援园员豫孕月杂液中.
加入孕耘鄄悦阅员猿猿抗体缘μ造,室温暗处孵育猿园皂蚤灶.
用猿皂造的园援园员豫孕月杂·圆远缘·易善永,等援吉西他滨联合再匀鄄员远对肝癌干细胞样细胞的影响液洗涤细胞员次,园援缘豫甲醛固定,常温暗处孵育员园皂蚤灶.
园援园员豫孕月杂液洗猿次,去除未结合的抗体.
细胞重悬于员皂造的园援园员豫孕月杂液中,上流式细胞仪检测悦阅员猿猿垣细胞.
员援缘摇统计学处理计量资料以珋曾依泽表示,两组间比较应用贼检验.
采用杂孕杂杂员苑援园统计软件进行分析处理.
孕约园援园缘表示差异有统计学意义.
圆摇结摇果圆援员摇吉西他滨联合再匀鄄员远治疗后裸鼠移植瘤的生长变化接种悦阅员猿猿垣酝匀悦悦怨苑匀细胞后猿耀缘凿,全部裸鼠均长出肉眼可见的肿瘤,移植瘤突出皮肤,呈不规则性生长,边界清楚,活动度差,质地较韧.
治疗结束后继续喂养观察苑凿,将裸鼠脱颈处死,切下皮下移植瘤.
移植瘤为淡红色,多呈椭圆形或圆形,部分呈分叶状,表面偶有突起结节,质脆,部分中心有坏死.
治疗组和对照组移植瘤的大小和重量分别为(源苑园援缘圆依源员援圆园)皂皂猿增泽(员猿员园援愿猿依员苑源援园员)皂皂猿;(园援源远依园郾园源)早增泽(员援猿园依园援员苑)早(均孕约园援园缘),表明吉西他滨联合再匀鄄员远对移植瘤有明显抑制作用.
圆援圆摇原代培养移植瘤细胞球的形成在无血清培养基中,接种移植瘤细胞后员圆澡左右可观察到大部分细胞呈贴壁生长,此部分细胞主要为分化成熟的肿瘤细胞、成纤维细胞、残存的红细胞或者粒细胞等.
由于无血清培养基主要适宜肿瘤干细胞样细胞的悬浮生长,其余的细胞则呈贴壁生长,在传代时逐渐将其清除;圆源耀源愿澡可看到少数细胞呈分裂状态;源愿耀苑圆澡部分细胞相互聚集并迅速增殖,形成数目不等的球形多细胞聚集体,称之为肿瘤细胞球.
这些细胞球呈半悬浮或悬浮状态生长,卵圆形或圆形,由几个到几十个不等的细胞组成.
随着培养时间的延长,可见肿瘤细胞球体积也逐渐增大,数目也逐渐增多.
肿瘤细胞球周边细胞较亮,折光性较强,中心区细胞密度高,透光度较差(图员).
治疗组和对照组细胞球的数量和直径分别为:(苑援缘依圆援源)个增泽(员远援园依猿援缘)个,(员苑愿援猿园依员怨援圆员)μ皂增泽(员猿员郾园远依圆园援怨远)μ皂(均孕约园援园缘).
圆援猿摇吉西他滨联合再匀鄄员远治疗后悦阅员猿猿垣细胞的变化本实验采用流式细胞仪检测圆组移植瘤原代细胞培养中的悦阅员猿猿垣细胞所占的百分比.
治疗组和对照组中悦阅员猿猿垣细胞所占的百分比分别为(远援圆源依园援怨远)豫增泽(员愿援圆远依员援苑远)豫(图圆,孕约园郾园缘).
图员摇肿瘤细胞原代培养形成细胞球的过程(伊员园园)粤:园澡;月:源愿澡;悦:苑凿;阅:员源凿图圆摇流式细胞仪检测原代培养移植瘤细胞悦阅员猿猿垣细胞的百分比粤:治疗组;月:对照组猿摇讨摇论随着对干细胞研究的不断深入,人们逐渐认识到肿瘤不仅是一种基因病,而且还是一种干细胞病[员鄄猿].
肿瘤是由为数不多的肿瘤干细胞和大多数分化相对成熟的肿瘤细胞构成的异质性细胞团.
悦杂悦具有自我更新、无限增殖和多向分化潜能,它是形成不同分化程度肿瘤以及肿瘤不断生长的源泉,也是肿瘤发生、发展、复发及转移等过程中的"动力细胞"或者"起始细胞".
悦杂悦假说的提出为肿瘤研究开辟了一个新的思路,使人们能够从另一个视角更好地了解肿瘤的本质,为全面阐明肿瘤发生、发展、转移、复发和多药耐药机制,以及肿瘤治疗提供新的途径和方法[源].
传统的抗肿瘤治疗主要是针对快速增殖的普通肿·猿远缘·中国肿瘤生物治疗杂志,圆园员园年员园月,员苑(缘)瘤细胞,而忽视了悦杂悦的存在.
由于悦杂悦常常处于相对静止状态,因此,它们一般不会被针对快速分裂增殖细胞的传统化疗所根除.
针对悦杂悦的抗肿瘤治疗可能成为未来有效抗肿瘤治疗的一种主要策略[缘鄄远].
近年来研究[苑鄄愿]发现,悦杂悦与其血管巢相互依赖,使得血管巢成为抗肿瘤治疗的一个重要靶点.
由于血管内皮细胞是悦杂悦血管巢的重要组成部分,抑制血管内皮细胞可破坏悦杂悦的血管巢,使悦杂悦失巢凋亡,进而抑制肿瘤的生长.
本研究以常用的悦阅员猿猿作为肝癌干细胞样细胞的表面标志[怨],并以此来对人肝癌细胞株酝匀鄄悦悦怨苑匀进行分选,建立裸鼠移植瘤模型,然后进行低剂量吉西他滨联合再匀鄄员远治疗.
其中,再匀鄄员远是我国近几年研发的一种新型重组人血管内皮抑制素.
低剂量节拍性化疗是不间断持续性给予低剂量细胞毒性药物,以肿瘤组织中活化的血管内皮细胞为治疗靶点的一种新型抗肿瘤血管生成治疗方法[员园鄄员员].
本研究结果显示,低剂量吉西他滨联合再匀鄄员远治疗不仅能够使肝癌干细胞样细胞移植瘤体积缩小,而且从原代培养肿瘤细胞球的形成和流式细胞仪检测的结果来看,均提示移植瘤中肝癌干细胞样细胞成分也明显减少.
因此,可以认为低剂量吉西他滨联合再匀鄄员远治疗对肝癌干细胞样细胞有杀伤作用.
其可能机制是:抗血管生成治疗破坏了肝癌干细胞样细胞的血管巢,继而肝癌干细胞样细胞与其血管巢失去了相互作用,引起肝癌干细胞样细胞某些干细胞特性的减少或者丧失,导致肝癌干细胞样细胞增殖率的提高,阅晕粤损修复能力的降低等[员圆].
这些改变使肝癌干细胞样细胞对的细胞毒性作用更加敏感,因而联合治疗可选择性清除肝癌干细胞样细胞.
吉西他滨联合重组人血管内皮抑制素可抑制肝癌干细胞样细胞的生长,靶向清除肝癌干细胞样细胞,是一种切实可行的肝癌治疗策略.
[参考文献][员]摇酝葬则曾允援悦葬灶糟藻则则藻泽藻葬则糟澡援酝怎贼葬灶贼泽贼藻皂糟藻造造泽皂葬赠泽藻藻凿糟葬灶糟藻则[允]援杂糟蚤藻灶糟藻,圆园园猿,猿园员(缘远猿愿):员猿园愿鄄员猿员园援[圆]摇允燥则凿葬灶悦栽,郧怎扎皂葬灶酝蕴,晕燥遭造藻酝援悦葬灶糟藻则泽贼藻皂糟藻造造泽[允]援晕耘灶鄄早造允酝藻凿,圆园园远,猿缘缘(员圆):员圆缘猿鄄员圆远员援[猿]摇韵'月则蚤藻灶悦粤,运则藻泽燥粤,阅蚤糟噪允耘援悦葬灶糟藻则泽贼藻皂糟藻造造泽蚤灶泽燥造蚤凿贼怎皂燥则泽:粤灶燥增藻则增蚤藻憎[允]援杂藻皂蚤灶砸葬凿蚤葬贼韵灶糟燥造,圆园园怨,员怨(圆):苑员鄄苑苑援[源]摇粤造鄄匀葬躁躁酝,月藻糟噪藻则酝宰,宰蚤糟澡葬酝,宰藻蚤泽泽皂葬灶陨,悦造葬则噪藻酝云援栽澡藻则葬责藻怎贼蚤糟蚤皂责造蚤糟葬贼蚤燥灶泽燥枣糟葬灶糟藻则泽贼藻皂糟藻造造泽[允]援悦怎则则韵责蚤灶郧藻灶鄄藻贼阅藻增,圆园园源,员源(员):源猿鄄源苑援[缘]摇耘赠造藻则悦耘,砸蚤糟澡允晕援杂怎则增蚤增葬造燥枣贼澡藻云蚤贼贼藻泽贼:悦葬灶糟藻则泽贼藻皂糟藻造造泽蚤灶贼澡藻则葬责藻怎贼蚤糟则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻葬灶凿葬灶早蚤燥早藻灶藻泽蚤泽[允]援允悦造蚤灶韵灶糟燥造,圆园园愿,圆远(员苑):圆愿猿怨鄄圆愿源缘援[远]摇宰蚤灶择怎蚤泽贼砸允,月燥怎糟澡藻则阅酝,宰燥燥凿酝,云怎则藻赠月云援栽葬则早藻贼蚤灶早糟葬灶糟藻则泽贼藻皂糟藻造造泽枣燥则皂燥则藻藻枣枣藻糟贼蚤增藻贼澡藻则葬责蚤藻泽:栽葬噪蚤灶早燥怎贼糟葬灶糟藻则'泽造燥糟燥鄄皂燥贼蚤增藻藻灶早蚤灶藻[允]援月蚤燥糟澡藻皂孕澡葬则皂,圆园园怨,苑愿(圆):猿圆远鄄猿猿源援[苑]摇悦葬造葬遭则藻泽藻悦,孕燥责责造藻贼燥灶匀,运燥糟葬噪酝,匀燥早早栽蕴,云怎造造藻则悦,匀葬皂鄄灶藻则月,藻贼葬造援粤责藻则蚤增葬泽糟怎造葬则灶蚤糟澡藻枣燥则遭则葬蚤灶贼怎皂燥则泽贼藻皂糟藻造造泽[允]援悦葬灶糟藻则悦藻造造,圆园园苑,员员(员):远怨鄄愿圆援[愿]摇再葬灶早在允,宰藻糟澡泽造藻则鄄砸藻赠葬砸允援匀蚤贼'藻皂憎澡藻则藻贼澡藻赠造蚤增藻:栽葬则早藻贼蚤灶早贼澡藻糟葬灶糟藻则泽贼藻皂糟藻造造灶蚤糟澡藻[允]援悦葬灶糟藻则悦藻造造,圆园园苑,员员(员):猿鄄缘援[怨]摇杂怎藻贼泽怎早怎粤,晕葬早葬噪蚤酝,粤燥噪蚤匀,酝燥贼燥澡葬泽澡蚤栽,运怎灶蚤泽葬凿葬栽援悦澡葬则鄄葬糟贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶燥枣悦阅员猿猿垣澡藻责葬贼燥糟藻造造怎造葬则糟葬则糟蚤灶燥皂葬糟藻造造泽葬泽糟葬灶糟藻则泽贼藻皂辕责则燥早藻灶蚤贼燥则糟藻造造泽[允]援月蚤燥糟澡藻皂月蚤燥责澡赠泽砸藻泽悦燥皂皂怎灶,圆园园远,猿缘员(源):愿圆园鄄愿圆源援[员园]运葬皂葬贼粤粤,运蚤皂栽允,蕴葬灶凿藻灶悦晕,蕴怎悦,匀葬灶蕴再,蕴蚤灶再郧,藻贼葬造援酝藻贼则燥灶燥皂蚤糟糟澡藻皂燥贼澡藻则葬责赠藻灶澡葬灶糟藻泽贼澡藻藻枣枣蚤糟葬糟赠燥枣葬灶贼蚤增葬泽糟怎造葬则贼澡藻则葬责赠蚤灶燥增葬则蚤葬灶糟葬灶糟藻则[允]援悦葬灶糟藻则砸藻泽,圆园园苑,远苑(员):圆愿员鄄圆愿愿援[员员]蕴葬择怎藻灶贼藻月,蕴葬糟葬泽葬悦,郧蚤灶藻泽贼伽酝酝,悦葬泽葬灶燥增葬泽韵,云蚤早怎藻则葬泽粤,郧葬造葬灶酝,藻贼葬造援粤灶贼蚤葬灶早蚤燥早藻灶蚤糟藻枣枣藻糟贼燥枣早藻皂糟蚤贼葬遭蚤灶藻枣燥造造燥憎蚤灶早皂藻贼鄄则燥灶燥皂蚤糟葬凿皂蚤灶蚤泽贼则葬贼蚤燥灶蚤灶葬责葬灶糟则藻葬泽糟葬灶糟藻则皂燥凿藻造[允]援酝燥造悦葬灶糟藻则栽澡藻则,圆园园愿,苑(猿):远猿愿鄄远源苑援[员圆]月造葬灶泽枣蚤藻造凿允粤,悦葬则葬早葬糟蚤葬灶怎阅,粤造藻曾葬灶凿藻则匀砸,栽葬灶早则藻葬酝粤,酝燥则蚤鄄贼葬杂再,蕴燥则葬灶早阅,藻贼葬造援悦燥皂遭蚤灶蚤灶早葬早藻灶贼泽贼澡葬贼贼葬则早藻贼贼澡藻贼怎皂燥则皂蚤鄄糟则燥藻灶增蚤则燥灶皂藻灶贼蚤皂责则燥增藻泽贼澡藻藻枣枣蚤糟葬糟赠燥枣葬灶贼蚤糟葬灶糟藻则贼澡藻则葬责赠[允]援悦造蚤灶悦葬灶糟藻则砸藻泽,圆园园愿,员源(员):圆苑园鄄圆愿园援[收稿日期]摇圆园员园原园缘原圆愿[修回日期]摇圆园员园原园苑原员圆[本文编辑]摇韩摇檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻檻殤殤殤殤丹《中国肿瘤生物治疗杂志》欢迎投稿、欢迎订阅摇·源远缘·