卵泡慢速冷冻和玻璃化冷冻对人类卵巢组织中卵泡形态的影响（论文范文）

慢速冷冻和玻璃化冷冻对人类卵巢组织中卵泡形

态的影响

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主题 关于论文中的医学论文”的参考范文。

属性 Doc-00X9ZVdoc格式正文3706字。质优实惠欢迎下载

作者 佚名

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搞要. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .1

关键字卵巢组织;慢速冷冻;玻璃化冷冻卵泡. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .2

1材料与方法. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .4

正文

慢速冷冻和玻璃化冷冻对人类卵巢组织中卵泡形态的影响

作者彭艳于丛一李予麦美琪冯淑英杨冬梓张清学

搞要

摘要目的比较慢速冷冻、麦管玻璃化冷冻和尼龙网玻璃化冷冻对人类卵巢组织中卵泡形态的影响。方法16例人卵巢组织切成薄片随机分配到新鲜卵巢组(A组)、麦管玻璃化冷冻组B组 、尼龙网玻璃化冷冻组C

组和慢速冷冻组D组后行组织学和电镜检查。结果A、 B、 C、 D组中形态正常的原始卵泡比例分别为%±%、%±%、%±%、%±%形态正常的初级卵泡比例分别为%±%、%±%、%±%、%±%。 D组中形态正常的原始卵泡比例和初级卵泡比例均明显低于A、 B、 C组。 B、 C组形态正常的原始卵泡比例和初级卵泡比例与A组相比无统计学差异。 B、 C组中形态正常的原始卵泡超微结构无明显改变D组中形态正常的原始卵泡超微结构存在一定程度的改变。结论玻璃化冷冻是人类卵巢组织较适宜的冷冻保存方法

关键字卵巢组织;慢速冷冻;玻璃化冷冻卵泡

Abstract: 【Objective】 To compare the effect of slow cool ingwith vitrification to get a more effective procedure for humanovarian tissue cryopreservation. 【Methods】 Ovarian biopsies from16 patients were cut into ovarian pieces (OPs)of 1mm thicknesswhich randomlydistributed into fresh OPs (GroupA), conventional -straw vitrificated OPs (Group B),vitrificated OPs using nylon mesh(Group C)and slowcooled OPs (Group D) treatmentGroups.

Histological and ultrastructural observation of OPs was performedafter cryopreservation. 【Results】 The proportions ofmorphological lynormal primordial and primaryfol l icles from GroupA,Group B,Group C, and Group Dwere%±%and%±%,%±%and%±%,%±%and%±%,%±%and%±%, respectively.Theproportionsof morphological lynormal primordial and primaryfol l icles from Group D were lower than those from Group A,Group B,and Group C.The difference in proportions of morphological ly

normal primordial fol l iclesamong Group A,Group B,and Group Cwas notsignificant, so were the proportions of morphological lynormal primaryfol l icles.The ultrastructural studies showed that inprimordial fol l icles considered normal at histological analysis, thereare no difference among Group A,Group B,and Group C.Whi lethere were a few abnormal ities in Group D. 【Conclusion】

Vitrification is more favorable than slowcool ing in human ovariancryopreservation.

Key words:ovarian tissue; slow freezing;vitrification  fol l icle

随着医学诊疗技术的飞速发展恶性肿瘤患者的生存率得到明显提高但是抗癌治疗对卵巢功能存在一定程度的损伤出现月经稀发、闭经、不孕和卵巢功能早衰等对患者的生存质量和生育能力造成严重影响。因此如何保存患者的卵巢功能成为迫切需要解决的问题。卵巢组织冷冻保存是一种较理想的卵巢功能保存方法。 目前常用的冷冻方法是慢速冷冻。但是慢速冷冻难以完全避免冰晶形成而且需要借助精密控温仪器操作较复杂从而影响慢速冷冻在卵巢组织冷冻保存中的推广应用。玻璃化冷冻是近年来出现的一种新的冷冻方法操作简便无需精密仪器控温 1,2 。玻璃化冷冻的关键是使组织细胞较好的形成“玻璃化”态尽量减少冰晶的形成。 目前主要是通过改良冷冻载物加快冷冻降温速度来改善玻璃化冷冻效果。本研究比较慢速冷冻、尼龙网玻璃化冷冻和麦管玻璃化冷冻对人类卵巢组织中卵泡形态的影响探讨人类卵巢组织适宜的冷冻保存方法为冻融卵巢组织在移植、体外培养等研究奠定基础。

1材料与方法

标本来源

选取中山大学附属第二医院妇产科2004年6月至2005年2月间进行卵巢手术的患者16例为研究对象年龄2735 ±岁有规律月经、无内分泌紊乱、无放化疗史且半年内无激素服用史。卵巢组织冷冻保存通过医院生殖医学伦理委员会批准与患者签署知情同意书。

实验方法

①在开腹戒腹腔镜手术中活检外观正常的卵巢组织在室温保存的磷酸盐缓冲液中迅速运送至实验室。将卵巢皮质剪成约5mm×2mm×1mm的组织片随机分配到新鲜卵巢组A组 、麦管玻璃化冷冻组B组 、尼龙网玻璃化冷冻组C组和慢速冷冻组D组 。②B组卵巢组织片浸泡在快速冷冻液中含有mol/L乙二醇、 mol/L蔗糖、 100mL/L胎牛血清的磷酸盐缓冲液 在室温下平衡10min用麦管mL按3段式法装管炭粉封口后直接投入液氮中。保存48 h后采用3步法依次在含有mol/L蔗糖和100mL/L胎牛血清的磷酸盐缓冲液、 mol/L蔗糖和50mL/L胎牛血清的磷酸盐缓冲液、 mol/L蔗糖和25mL/L胎牛血清的磷酸盐缓冲液中逐步稀释去除冷冻保护剂每次平衡时间5min最后在磷酸盐缓冲液中冲洗2次。③C组卵巢组织片在快速冷冻液中室温下平衡10min将卵巢组织片平铺放入尼龙网袋长2cm、宽2cm、网孔直径80μm 将尼龙网袋直接投入液氮中。保存48 h后进行快速复温复温方法同B组。④D组卵巢组织片浸泡在慢速冷冻液中含有mol/L乙二醇、mol/L蔗糖、 50mL/L胎牛血清的磷酸盐缓冲液 在0℃平衡30min 

装管方法同B组采用O ktay[3]的慢速冷冻方法保存。将麦管放入程序冷冻仪内从0℃开始以2℃/min的速度降温至-7℃平衡10min后进行人工植冰再以℃/min的速度缓慢降温至-40℃后以10℃/min的速度降温至-140℃最后将麦管投入液氮中保存48 h后进行快速复温以冷冻保护剂的浓度梯度逐步置换冷冻保护剂含有mol/L乙二醇、 mol/L蔗糖、 50mL/L胎牛血清的磷酸盐缓冲液含有mol/L乙二醇、 mol/L蔗糖、 50mL/L胎牛血清的磷酸盐缓冲液含有mol/L乙二醇、 mol/L蔗糖、 50mL/L胎牛血清的磷酸盐缓冲液 每次平衡时间5min最后在磷酸盐缓冲液中冲洗2次。

组织学检查

石蜡包埋卵巢组织以5 μm的厚度连续切片间隔50μm的厚度行HE染色在光镜下阅片。单盲法观察原始卵泡和初级卵泡的形态。按Gougeon[2]的标准观察卵泡形态正常的卵泡结构为卵泡和卵母细胞均呈圆形卵母细胞核无固缩颗粒细胞分布均匀基底膜完整异常的卵泡结构为卵泡结构不完整戒消失卵母细胞皱缩卵母细胞核固缩颗粒细胞排列紊乱。原始卵泡和初级卵泡计数以卵母细胞核作为标记计算出每个卵巢组织片中形态正常的原始卵泡比例和初级卵泡比例。其他发育阶段的卵泡数目极少未进行统计。

电镜检查

A、 B、 C、 D4组中每组各选2个卵巢组织片固定在25g/L戊二醛中经包埋修块后行半薄切片甲苯胺蓝染色后在光镜下定位组织学形态正

常的原始卵泡超薄切片后经醋酸铀及硝酸铅双重染色后在透视电镜下观察超微结构。

统计学处理方法

数据用统计软件处理结果用均数±标准差表示各组中形态正常的卵泡比例采用One-Way ANOVA分析各组之间两两比较用LSD方法 P<认为差异有显著性。

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