溶液释放20%网速

药学学报ActaPharmaceuticaSinica2011,46(11):13851389·1385·复方红霉素延迟起释型缓释片的研制及其体外释放陈海霞1,陈志鹏2,王启荣2*,刘泽坤3,马全龙4(1.
山东大学齐鲁医院药学部,山东济南250012;2.
山东大学附属千佛山医院,山东济南250014;3.
山东大学威海分校海洋学院,山东威海264209;4.
济南新方医药科技有限公司,山东济南250100)摘要:以重均分子量50000聚乳酸(polylacticacid,PLA)为载体,与一定比例的红霉素(erythromycin,EM)和醋酸泼尼松(prednisoneacetate,PNA)混合制备复方红霉素延迟起释型缓释片.
利用紫外分光光度法检测EM和高效液相法检测PNA在体外介质中的释药量.
缓释片持续释放时间约为21天,EM平均含量为99.
7mg/片,RSD为0.
82%;PNA平均含量为10.
03mg/片,RSD为0.
93%.
缓释片从第5天开始缓慢而平稳地释放,在初期的突释现象尤为显著.
在21天内EM累积释放量为86.
1%,PNA累积释放量为78.
3%.
结果表明:缓释片制备方法可行,释药性能良好,临床疗效显著.
关键词:聚乳酸;复方红霉素;延迟起释;缓释片中图分类号:R943文献标识码:A文章编号:0513-4870(2011)11-1385-05CompounderythromycinsustainedreleasepreparationanditsinvitroreleaseCHENHai-xia1,CHENZhi-peng2,WANGQi-rong2*,LIUZe-kun3,MAQuan-long4(1.
DepartmentofPharmacyoftheQiluHospitalofShandongUniversity,Jinan250012,China;2.
QianfoMountainHospitalofShandongUniversity,Jinan250014,China;3.
MarineCollegeofShandongUniversityatWeihai,Weihai264209,China;4.
XinfangMedicineScienceTechnologyLimitedCompanyofJinan,Jinan250100,China)Abstract:Usingtheweight-averagemolecularweight50000polylacticacid(PLA)asacarrier,andacertainproportionoferythromycin(EM)andprednisoneacetate(PNA)tomixedpreparethecompounderythromycinsustainedreleasepreparation(sustained-releasetablets).
Usingultravioletspectrophotometryandhighperformanceliquidchromatography(HPLC)todetectseparatelythereleaseamountofEMandPNAinvitromedium.
Thesustained-releasetabletsreleaseforabout21days,theaveragecontentofEMis99.
7mg/table,RSD=0.
82%;andtheaveragecontentofPNAis10.
03mg/table,RSD=0.
93%.
Within21days,thecumulativereleasesofEMandPNAare86.
1%and78.
3%,respectively.
Thedrugreleaseissteadyandslowafter5days,theburstreleasephenomenoninearlystageismoresignificant.
Theresultsshowedthatthesustained-releasetabletpreparationmethodisfeasible,thereleaseperformanceisgoodandtheclinicalefficacyissignificant.
Keywords:polylacticacid;compounderythromycin;sustained-release;sustainedreleasepreparation聚乳酸(polylacticacid,PLA)具有优异的生物相容性和生物可降解性,根据其相对分子质量的大小和制剂方式的不同可控制所载药物释放速度,成收稿日期:2011-04-04.
基金项目:山东省卫生科技发展计划资助项目(2007·HW118).
*通讯作者Tel:13791120656,Fax:86-531-82963647,E-mail:lwj65@126.
com为目前研究最多的药物控释基质材料之一[1].
红霉素(erythromycin,EM)对大多数革兰阳性菌及阴性菌均有较强的抑菌作用;醋酸泼尼松(prednisoneacetate,PNA)具有抗炎、抗过敏等作用.
慢性鼻鼻窦炎是常见病多发病,临床上多采取药物治疗、物理疗法和手术治疗等,但治疗效果不甚明显[2,3].
本实验将EM和PNA按照一定比例混合,采用溶解法与·1386·药学学报ActaPharmaceuticaSinica2011,46(11):13851389PLA制备成缓释片;通过体外释药实验,选择符合治疗慢性鼻鼻窦炎释药剂量的缓释片;将缓释片由下鼻道开窗植入上颌窦内,对减轻或消除鼻腔黏膜和黏膜下层的慢性炎症疗效显著,为更好地治疗慢性鼻鼻窦炎寻找一种新的治疗方法.
材料与方法仪器TUV-1800PC型紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司);SSI型高效液相色谱仪,LabAlliance泵(天津市兰博实验仪器设备有限公司);HypersilODS2(250mm*4.
6mm*5μm)色谱柱(大连依利特科学仪器有限公司);TDP单冲压片机(上海天祥健台制药机械有限公司).
药品与试剂PLA(山东医疗器械研究所);EM(西安利君制药有限责任公司);PNA(浙江仙琚制药股份有限公司);EM标准品(中国药品生物制品检定所);PNA对照品(中国药品生物制品检定所);乙腈为色谱纯,水为纯化水;其余所用试剂均为分析纯.
缓释片的制备参照文献中缓释片制备方法[4,5],在无菌条件下,将PLA溶于丙酮,分别加入占缓释片总量10%(R1)、20%(R2)、30%(R3)的EMPNA(10∶1)混合物,常温下密闭48h,置50℃水浴中加热溶解、搅匀,待溶剂逐渐挥发使体系变成黏稠状后,50℃真空干燥,粉碎得到混合均匀的白色PLA-EM-PNA粉末,压成异型片(1.
7cm*0.
8cm*0.
4cm),每片重0.
5g.
缓释片中EM体外释放性能测定采用紫外分光光度法进行测定[69].
取本品2片,以pH7.
0的磷酸盐缓冲液(phosphatebuffersolution,PBS)溶液100mL为溶出介质,转速为50r·min1,取样时间点为1、3、5、7、9、11、13、15、17、19和21天,吸出介质溶液并补充PBS溶液,取此溶液适量,用pH7.
0的PBS溶液稀释成每毫升中约含红霉素55μg的溶液;另取本品10片,研细,精密称取适量(相当于平均片重),加乙醇适量溶解后,按标示量用pH7.
0的PBS溶液稀释成每毫升中约含红霉素55μg的溶液.
分别量取上述两种溶液各5mL,加硫酸溶液(75→100mL)5mL,混匀,放置约30~40min,按照分光光度法在482nm的波长处分别测定吸收度,计算每片的释放量.
标准曲线制备:精密称取干燥至恒重的EM标准品12.
5mg,置于50mL量瓶中,用pH7.
0的PBS溶解并稀释至刻度,再分别精密移取2.
0、4.
0、6.
0、8.
0和10.
0mL置25mL量瓶中,用pH7.
0的PBS稀释至刻度,量取上述溶液各5mL,加硫酸溶液(75→100mL)5mL混匀,放置约30~40min,按照紫外分光光度法,于482nm波长处测定吸收度值.
阴性空白实验:按照"缓释片的制备"方法制备不含EM的样品,按照"标准曲线制备"方法配制溶液,在482nm波长处测定吸收度值,结果表明PNA及辅料在482nm波长处无吸收,对EM测定无干扰.
回收率实验:精密称取样品(含量99.
5%)适量(约相当于EM12.
5mg),置50mL量瓶中,共9份,分别精密加入EM标准品适量,用pH7.
0的PBS溶解,按"缓释片中EM体外释放性能测定"方法操作,平均回收率为98.
1%,RSD为1.
5%.
缓释片中PNA体外释放性能测定参照《中国药典》2010年版二部PNA片项下方法[10],采用高效液相色谱法进行测定.
色谱条件:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈水(33∶67)为流动相;检测波长为240nm.
PNA与相邻杂质峰的分离度应符合要求,理论板数按PNA峰计算不低于3000.
测试液的制备:精密称取PNA对照品适量,加甲醇溶解并定量稀释制成0.
5mg·mL1的对照品贮备液.
精密量取对照品贮备液5.
0mL置25mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度、摇匀,制成对照品溶液.
取本品10片,研细混合均匀,精密称取适量(约相当于PNA5mg)置50mL量瓶中,加甲醇适量使PNA溶解,用甲醇稀释至刻度、摇匀过滤,制成供试品溶液.
准确称取不含PNA的阴性样品约0.
25g置50mL量瓶中,同法制备阴性样品溶液.
系统适用性实验及专属性考察:在上述色谱条件下,分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液各20μL,注入液相色谱仪,记录色谱图,结果发现EM及辅料不干扰PNA测定.
线性关系考察:精密量取PNA对照品贮备液0.
5、1.
0、2.
5、4.
0、5.
0、7.
5和10.
0mL置25mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀.
精密量取20μL注入液相色谱仪,记录峰面积.
精密度实验:取质量浓度为20、100和150μg·mL1的PNA对照品溶液,分别于同日内重复进样5次和每天取样连续测定5天.
PNA低、中、高3个浓度日内RSD分别为0.
96%、1.
14%、1.
19%,日间RSD分别为1.
28%、1.
35%、1.
62%.
结果表明此方法的精密度良好.
重复性实验:取同批号样品6份,按供试品溶液陈海霞等:复方红霉素延迟起释型缓释片的研制及其体外释放·1387·制备得到溶液,取20μL注入液相色谱仪,记录色谱图,RSD为0.
95%.
回收率实验:精密称取样品(含量99.
3%)适量(约相当于PNA5mg),置50mL量瓶中,共9份,分别精密加入PNA对照品适量,加甲醇适量,充分振摇使PNA溶解,按供试品溶液制备,得到平均回收率为99.
3%,RSD为1.
26%.
缓释片体外溶解性测定在体外建立类似人体的上颌窦4cm*2cm*2cm玻璃立方体模型,于中央上方开口,将此模型置于温度为33~35℃,湿度为60%~90%的恒温水浴箱中,取R1、R2、R3缓释片各3片置于模型中,分别于3、6、9、12、15、18、21和24天测其剩余药片干重,观察其溶解速度.
R2缓释片药物含量的测定EM含量测定:取本品4片研细,加乙醇适量,分次研磨使EM溶解,并用水稀释成每毫升约含1000单位的溶液,摇匀静置,精密量取悬浮液适量,对照抗生素微生物检定法测定其含量.
EM1000单位相当于1mg.
PNA含量测定:取本品20片精密称重研细,取适量(约相当于PNA5mg)置50mL量瓶中,加甲醇30mL充分振摇使PNA溶解,用甲醇稀释至刻度,摇匀过滤.
精密量取续滤液20μL注入液相色谱仪,记录色谱图;另取PNA对照品,同法测定.
按外标法以峰面积计算供试品中PNA的含量.
R2缓释片的临床疗效观察选取71例住院患者,均为经保守治疗无效或经2次上颌窦穿刺无效者,符合慢性鼻-窦炎鼻息肉临床分型分期及内窥镜下鼻窦手术疗效评定标准要求[11].
按就诊顺序随机分成两组,实验组(33例)和对照组(38例).
告知患者本次研究目的及方法,并签署知情同意书.
对照组采用钩突切除并开放上颌窦口;实验组在0°和30°鼻内镜下行下鼻道开窗术,窗口大小为1cm*2cm,单侧植入R2缓释片2片,观察其临床症状的变化,疗效标准参照《慢性鼻-窦炎鼻息肉临床分型分期及内窥镜下鼻窦手术疗效评定标准》.
统计学分析等级资料采用Ridit检验,计数资料采用χ2检验,计量资料采用t检验.
以P0.
05).
结果见表1.
Figure1Cumulativereleaseinvitroofthecompounderyth-romycinsustainedreleasepreparation.
R1,R2,R3:Drugcontentof10%,20%,30%insustained-releasetablets,respectivelyTable1Accumulationinvitroreleasepercentageoferythro-mycin(EM)andprednisoneacetate(PNA)insustainedreleaseimplantwithdifferentdrugcontentswithin21daysTime/dayContent/%67212110%EM32.
942.
979.
8PNA25.
844.
270.
020%EM52.
632.
585.
1PNA41.
235.
176.
330%EM56.
835.
592.
3PNA45.
247.
180.
54不同含药量缓释片的体外释药模型拟合R1缓释片体外释药模型拟合:EM:Q=27.
054lnt2.
5055,R2=0.
9676.
PNA:Q=25.
012lnt7.
4439,R2=0.
9426.
·1388·药学学报ActaPharmaceuticaSinica2011,46(11):13851389R2缓释片体外释药模型拟合:EM:Q=27.
013lnt+8.
4909,R2=0.
9807.
PNA:Q=25.
858lnt+2.
2158,R2=0.
9749.
R3缓释片的体外释药模型拟合:EM:Q=28.
193lnt+9.
1685,R2=0.
9628.
PNA:Q=26.
546lnt+3.
8468,R2=0.
9726.
从相关系数可以看出,缓释片体外释放性能较好地符合Higuehi模型.
不同载药量的缓释片药物释放情况不同.
R1缓释片释放速率慢,R3缓释片释放速率快,根据慢性鼻鼻窦炎的治疗需要,R2缓释片最适合临床治疗要求.
5缓释片体外溶解性在类似上颌窦环境中,R1、R2、R3缓释片分别从第5天、第3天和第2天开始逐步溶解,至12、19、25天溶解约90%.
结果见图2.
Figure2Percentageofdissolvederythromycindelayed-releasetabletsafterrelease6R2缓释片药物含量经过对3批R2缓释片的药物含量测定,EM平均含量为99.
7mg/片,RSD为0.
82%;PNA平均含量为10.
03mg/片,RSD为0.
93%,均符合要求.
结果见表2.
Table2Sampleassayresults(n=3)BatchnumberErythromycin(mg/tablet)Prednisoneacetate(mg/tablet)8100199.
59.
9381002100.
610.
118100399.
010.
06Average99.
710.
03RSD/%0.
820.
937R2缓释片临床疗效观察R2缓释片在植入上颌窦20天内,其释放的药物能明显改善患者头痛、鼻塞、鼻腔异味和流脓涕等症状,因此一次使用R2缓释片可达到消除慢性鼻鼻窦炎炎症发作期的各种症状.
比较实验组和对照组在炎症发作期各种症状改善方面无统计学意义(P>0.
05),说明此方法与传统鼻内窥镜鼻窦手术治疗方法的疗效相似,但在术后痛苦、并发症、换药次数及住院费用等方面明显优于传统方法.
结果见表3、4.
Table3Twogroupsofchronicnasal-comparisonofimprovementofENTofsymptomsinpatientswithsinusitisGroupnCureEffectiveIneffectiveEffectiverate/%Experiment33256293.
94Control38269392.
10Total715115592.
96Table4Thepostoperativefollow-upsurveyresultsGroupnPainCost(RMB)AdhesionRelapseNumberofchangeoverExperiment333400050001112Control38184000100007245讨论PLA分子量越小、含药量越高,其释药速度越快[12].
在制备缓释片时,将PLA加入丙酮中溶解后,再加入EM和PNA,更易混合均匀,干燥后粉碎成大小适宜的颗粒,普通压片方法即可压制成异型缓释片.
在干燥过程中,曾做过常压干燥和减压干燥的对比,常压干燥时丙酮不易挥发,且温度高于70℃时,PLA与药物的混合物变色,随时间的延长,颜色越来越深,最后变成棕黑色,干燥物较硬且易黏结,干燥效果不佳.
而减压干燥时易于干燥,效果较好.
《中国药典》2010版二部红霉素肠溶片的溶出度释放度测定方法中,EM在PBS溶液中溶解度为277.
78μg·mL1,而本品在PBS溶液中最大质量浓度为250μg·mL1,最终确定了本实验中PBS溶液用量为100mL,分8次进行,可确保漏槽条件合格.
按照缓释片体外释放性能测定和溶解性测定结果,R1、R3缓释片不符合临床治疗时间需要.
由体外释放累积曲线图可见,R2缓释片中EM和PNA的释放在初期较快,维持时间大约为5天,药物释放量可占EM总量的52.
6%,占PNA总量的41.
2%.
此阶段释放的药物主要是由于缓释片表面积大,在缓释剂表面的药物向介质迅速扩散.
从第6天开始,药物减缓释放,至21天EM可释放总量的86.
1%、PNA释放了78.
3%,两种药物的释放特性基本一致,释放速率比较缓慢且比较均匀,符合临床治疗时间需要.
通过临床观察,使用此缓释剂治疗慢性鼻鼻窦陈海霞等:复方红霉素延迟起释型缓释片的研制及其体外释放·1389·炎,手术创伤小,无明显毒副作用,临床疗效显著,值得推广.
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