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第19卷第3期l991年9胃西北农业大学学报AclaUniv.
Agric.
Boreall—ozzidenlalisVo1.
1gNo.
3Sept.
199l早熟桃胚珠离体培养研究刘用生胡霓云路广明(西北农业大学嗣艺系,陕西梧睦)摘要胚发育指数分别为0.
15和0.
40的'西农早蜜'桃幼胚在肛稼离体培养条件下维持胚性生长,转移肛培养后备获得77.
8和100的成苗率,克服了桃幼胚营养中存在的早熟萌发、成苗率低等同题.
此外,取盛花后10d(胚处予=细盥原胚鹅)、17d(球形胚)、24d(球形胚)、31d心形胚)、38d和45d(肉眼看不到的幼胚)的胚睐进行培养,分别获得1.
7.
3.
{,14.
3.
22.
4,53·4和57·0的戚苗率,为克服李属果树种问杂奄桃珏早期j旺育的障碍,提供了新方法.
本文连研究了影响驻珠培养韵有关因素.
关蕾词桃,早生品种,胚睐,离体培养中田分粪号Q0d4.
6,S682.
103.
580年代以前早熟桃胚胎培养多采刚发育较完善的胚进行培养.
近年来,不少人将胚发育指数为0.
1~O.
42的幼胚培养成苗j,但因培养中极易发生早熟萌发,成苗率低,苗细弱、畸形,很难移栽成活.
因此,如何使幼胚维持胚性生长,克服早熟萌发,一直是引人注目的问题.
此外,在李属果树种间杂交中,以桃为母本的杂交组合往往发生胚的早期败育…,采用幼胚培养巳无能为力.
Ramming利用胚珠培养技术使小于lmm的早熟桃幼胚进一步生长,但来能使其萌发成苗.
姚强等使盛花后48d以前的早熟桃幼胚,在胚珠培养条件下未能取得成功.
本试验采用胚珠培养方法,旨在克服幼胚培养的早熟萌发,提高成苗率,并使更早期的胚珠培养成功,为极早熟桃育种和李属种间杂交育种奠定基础.
1材料与方法试验于1988~1989年在西北农业大学园艺系进行.
试材为自然授粉的'西农早蜜,桃果实内的胚珠.
从盛花后第3天开始,每周取样一次,共9次.
田问采样后取出一部分胚珠保存在Saafelice固定液中,用石腊切片法观察接种时胚所处的发育时期,另各取2O个胚、胚珠测其长度并称重,其余样品在室内经表面消毒后,剖出胚珠接种.
每瓶接种4~6个,每个处理12~14瓶.
接种后的胚珠在28±2℃,1000lx,每天16h光照条件下培养,20~60d后将长大的胚转至新培养基中(盛花后31d以前接种曲胚珠,其胚转至M9培养基中,38d以后的转至TM.
培养基中).
经l~5℃70d低温处理,再在室内(25~2℃,3000Ix,每天16h光照)培养4周,观察胚萌发成苗情况.
盛花后不同文骧拉葫H飙-l9qO·O8—29.
'囊在柯南取技师院目艺幕任敷.
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com西北农业大学学报19卷时期还做了取样时期、基本培养基种类和培养基状态蔗糖浓度、有机附加物,外源激素等比较试验.
2结果2.
1桃珏、旺珠的生长发育状况通过石腊切片观察到,盛花后lO,17~24,31,38~45d分别为二细胞原胚、球形胚、心形胚及肉眼看不到的幼胚j盛花后52,.
59d为可见胚,其胚发育指数分别为0.
15和0.
40.
胚珠在盛花后3~45d内迅速增大,至第59天达到最大值(见图l和图2).
图1胚、胚睐长度的变化1·压球J2·压图2胚、胚璩鲜重变化1·压珠I2·艇2.
2胚珠培养因子试验2.
2.
1取样时期从盛花后第3~59天的胚珠分9次接种在改良BT:固体培养基中(附加蔗糖4%,BA0.
5,TRIAL(卅烷醇)O.
5,LH250),培养后将胚再转移培养(见表1).
从表l看出,盛花后3~lOd的胚珠培养未能得到可见胚,盛花后l7~,59d的胚珠培养,随着时间的延长,可见胚率、成苗率呈升高的趋势.
盛花后59d的培养效果最好.
从不同取样时期的胚珠培养效果(表2)可以看出,可见胚率、成苗率和正常苗率随着胚发育程度的提高而逐渐增高.
裹1不同取样时期对胚发育豆成苗的影一2-2.
2基本培养基在盛花后3,24,38,,59d的胚珠培养中,分别采用Nitsch,N6,MT,SH,改良BTi和改良BT26种基本培养基(均附加BAO.
5,TRIAO.
5,LH250,4蔗糖)进行比较试验.
结果表明,盛花后3d在所有培养基上均未获得可维普资讯http://www.
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com第3靳刘用生等;早熟桃胚睬离体培养研究39见胚.
盛花后24d在各种培养基上都获得了较低的可见胚率和成苗率,培养基间无显著椭异.
其中在改良BT,培养基上获得了23.
8的可见胚率和14.
3的成苗率.
盛花后裹2不同取样时期的威苗效果38d在N培养基上效=果最佳(见表3).
盛花后5gd的胚珠,其平均胚长为6.
4film,胚经培养后得到了较好的发育.
在N.
培养基上,平均胚长为13.
0IIlffl,比原来增长了裹5培养基对胚发育殛威苗的彩响'·盛花后38d.
1倍.
在MT,SH,改良BT和改良BTz培养基上获得了100%的成苗率,其中在MT,SH培养基上分别获得了97.
2和96.
6的正常苗率,其效果最佳(见表4).
裹4培养基对胚发育蕊威苗的彩响'培养基接种数平均胚长(ram)成苗率正常苗辜NitschN6MTSH改良BTi改蛊BTt4|475145394510.
513.
011.
8l1.
811.
7l1.
6t4.
468.
9b97.
2·96.
6-87.
OLb75.
0·盛花后59d.
2.
2.
3培养基状态盛花后1O,31,52d的胚珠分别接种在固体(0.
6%琼脂)和液体脱脂棉作支撑物)的改良BTz培养基中)均附加BA0.
5,TRIA0.
5.
LH250,4%蔗一(糖).
结果表明,盛花后10d仅在液体培养基上得到一个可见胚,将其转移培养后得到株畸形苗.
盛花后31d在液体培养基上未获可见胚,而在固体培养基上得到了40.
4%的可见胚率和9.
6%的成苗率盛花后52d的培养效果,固体培养基上的显著优于液体培养(见表5).
2.
2.
4蔗糖浓度将盛花后17,24,38,52d的胚珠接种在附加不同浓度蔗糖的改良基BT培养基上进行培养.
结果表明,盛花后17d仅在4,6%两个处理中得到了很低mm肌叭让踮ⅢmⅢⅢ维普资讯http://www.
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com40西北农业大学学报19巷的可见胚率和成苗率.
盛花后24d在5个处理中均获得较低的可见胚率和成苗率.
盛花囊5培井基嵇奄对胚发育置戚苗的影响后38d在2%处理由所得可见胚率显著低于其它4种处理的j8和lO两处理的成苗率和正常苗率显著高于前3个处理的(见表6).
此外,在8和lo两处理中,出现囊B蔗浓虞对胚发青豆成苗的影响'·花后slid·了一些三子叶苗.
盛花后52d在6,8,10三处理中所得成苗率和正常苗率显著高于2%,4两处理,其中以6,8效果较好(见表7).
囊7蔗浓度对胚发青豆成苗影响'争;·花后52d.
2.
2.
5果格、葡萄格厦活性炭盛花后45d的胚珠,分别接种在附有l果糖,1葡萄糖,0.
1活性炭的改良BT2圃体培养基(附加BAO.
5,TRrA0.
5,4蔗糖)中,结果表明,附加1果糖或葡萄糖可显著提高成苗率和正常苗率,附加0.
1活性炭也可提高成苗率与正常苗率,但未达显著水平(见表8).
囊8果,蕾一芬对胚发青豆戚苗影响2·2,6有机附加物盛花后lO,31,52d的胚珠分别接种在附加LH.
CH,GLN(浓度均为250,500,1000rag/L)及YE(o05.
o.
2.
1.
O)的改良BT2固体培养维普资讯http://www.
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com第3期划用生等.
早热桃胚藤离体培养研究4i基中.
结果表明,盛花后l0d各处理均未得到可见胚.
盛花后31d,在附加GLN250处理中获得82.
4的可见胚率,显著高于对照,而附加1.
0YE则仅获得11.
4的可见胚率,显著低于对照.
在附加LH1000、cH1000、YE0.
2和YE1.
0%的处理中未能成苗盛花后52d,在培养基中附加cH25o.
~CH500可显著提高成苗率,但附加1.
0%YE则显著降低了成苗率.
2.
2.
7外源激素盛花后17,45d的胚珠接种在附加BA(O.
05,0.
1,0.
5,1.
0,2.
5)、』AA0.
5,TR[A0.
5以及BA0.
5+rAA(O.
1,0.
5,2.
5)和BA0.
5+TRIA(O.
1,0.
5,2.
5)的改良BT2固体培养基中.
结果表明,盛花后17d只有在BAO.
5+TRIA0.
5的处理中得到了很低的可见胚率和成苗率盛花后45d的成苗率和正常苗率以BA0.
5+TRIA2.
5的最高,分别为57.
9%和53.
1.
3讨论3.
1胚璩培养的意义胚珠培养是幼胚培养技术的重要改进.
胚珠在离体培养条件下既能维持胚性生长,又不发生早熟萌发,待胚充分发育后再行胚培养使极易成功.
如果幼胚在胚珠离体培养条件下发育得很充实,还可直播于土中,不但简化了培养程序,而且能减少试管苗移栽时造成的损失.
我们采用胚珠培养,使盛花后1O~59d内发育不同的幼胚都得到进一步生长,并取得不同程度的成苗率,对于特早熟桃育种以及李属果树种问杂交都有重要意义.
随着此项研究的继续和深入,若能使盛花后10d内的胚珠培养取得成功,则采用试管受精按术克服李属果树种间杂交不亲和性的障碍将成为可能.
因此,更早期的胚珠培养技术值得进一步研究.
3.
2早熟拂胚璩培养的影响因素3.
2.
1取样时期一般认为,取样时期越早,则胚所处的发育阶段越早,乜就越难培养.
培养球形胚期的胚珠成功例子较多.
而培养受精后不久的胚珠成功的却很少.
姚强等对盛花后48d以前的桃胚珠培养未能成功】.
本试验虽使盛花后10~45d的桃胚珠培养成功,但仍存在取样时期越早,成苗率越低的问惩.
我们认为,在育种实践时,应使胚在植株体内发育到最大限度再行离体营养,以取得最佳效果.
对于早熟和极早熟桃品种,在硬熟期取胚珠培养效果最好I在克服种间杂交不育时,应在杂种胚即将败育之前进行胚珠离体培养.
当然,杂种胚败育越早.
取样时期亦越早,成苗效果越差.
应通过改进培养技术以提高成苗效果.
3.
2.
2培养基种类及状态Ramming、姚强等进行桃胚珠培养时采用SH培养基"].
本试验表明,不同取样时期采用不同培养基效果差异显著,盛花后38,59d分别以N,MT为宜,棉花胚珠培养几乎全采用液体培养基.
Gray.
姚强等人认为固体培养基优子液体培养基".
本试验表明,'西农早蜜,桃后期的胚珠培养,固体培养基显著优子液体培养基.
3.
2.
3蔗糖浓度及其它磺源Ramming认为6%蔗糖对油桃胚珠培养效果最好"】.
姚强认为4%蔗糖对盛花后48d的桃胚珠培养效果最好….
本试验表明,盛花后38,52d的胚珠在较高浓度蔗糖(8)的培养基中成苗效果最好.
此外,盛花后38d的胚维普资讯http://www.
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com西北农业大学学报l0卷珠在附加较高浓度蔗糖(8~l0)的培养基中产生了一些三子叶苗,值得进一步研究.
Beasley发现在培养基中加入果糖或葡萄糖时可防止棉花胚珠变褐,且不会限翩胚珠膨大….
本试验表明,在培养基中附加1果糖或葡萄糖,虽不能阻止胚珠变褐,但能显著提高成苗率与正常苗率.
3.
2.
4有机附加物一般认为,有机附加物中含有多种氨基酸和生长物质,对胚珠培养是有利的.
本试验表明,仅在特定的取样时期,某些有机附加物对挑胚珠培养有'利.
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ultureinVitroofEarly-matu~_ingPeachLiuYongshengHuNiyilnLuGuangming(Departmento,Horticulture.
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Yanglin#,Shaonxi)AbstraetYoungembryoof"Xinongearly—maturinghoneypeach"withembryodevelopingindexesof0.
15and0.
40canmaintaintheembryogrowthundertheconditionsofinvitroeultureofovule.
Afterthetransfercuhure,theobtainedplantletsurvialrateswere77.
8and100respectively,thus,solvingtheprob-~lemsofearly—maturinggerminationexistedintheyoungembryoculture,andlownormalplantletratio.
Inaddition,theovulestakenfrom10days(emb7ryowithtwocells),38days(globularembryo),24days(globular),31days(heart—shaped),38daysand45days(immatureembryoinvisiblebynakedeyes)werecultured,theplantletsurvialrateswere1.
7,3.
4,14.
3,22.
4,53.
4,and57.
9respectively,thus,providinganewme=thodtoovercomethehurriesoftheearlyabortionofpeachembryojninter-specificCROSSofPrunus.
Also,thepaperdealswithsOmeotherelementsaffectingovuleculture.
Keywordspeach,early—maturingvariety,OVule,cultureinvitro·简讯·西瓜新品种"西农8号"荣获全国首届西甜瓜优良品种评选第四名由农业部主持和组织的全国首届西甜瓜优良品种评选活动,经过河南、河北及连云港三个试验点的田闱试验及室内鉴定评比,在全国各地选送的54个参加评选的新品种中,评选出7前lO名.
我校西瓜甜瓜研究室(主持人王鸣教授,主要参加人张兴平讲师)经多年试验选育的"西农8号"被评为第四名,其得分远超过对照品种台湾益农"新虹宝".
"西枉8号"以抗病,丰产、外观美,含糖量高、质细味甜、商品性好等优点受到,:泛好评.
该品种近年来在陕西、甘肃、山东、上海、北京、天章、武汉、吉林等地试种或示范均表现良好.
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